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美国药典关于胎牛血清细胞克隆率测定的描述

点击次数：8971 发布时间：2017/8/15 16:32:46

　　细胞克隆率的测定是评价胎牛血清功能的两大方法。本文威正翔禹/缔一生物专家为您分析美国药典关于胎牛血清细胞克隆率测定的描述。

该检测主要是评估贴壁细胞系的*佳生长状况。要分析细胞在合适生长条件下的增殖能力和单细胞的存活状况，细胞在低密度下的接种效率或克隆形成是一个优先选择的方法。对于评估血清批次的品质，这是一个非常灵敏的检查。该技术反映出细胞群体的生长速率差异，并可区分生长速率的变化（克隆大小）和细胞是否存活（克隆数量）。因为存在一些细胞的不均一性，因此需记住，细胞在低密度时，要长成单独的克隆，其生长表现会很不一样。因此，即使在*佳生长条件下，由于细胞之间的相互作用没有了，也很少有细胞能存活。克隆形成是一个测定细胞存活的实验，也用于优化细胞培养条件（培养基和血清的选择）。如果能证实一个克隆来自一个细胞，那么克隆效率就可以确定下来。

样本：对于每个血清批次，加20mlFBS到180mlEMEM中，0.22mm过滤除菌，4℃保存。

细胞制备：该实验只用于贴壁细胞（如HFL1 ａnd Mv 1 Lu）。一周前开始制备，2-3天换液。具体制备请参考文章《如何准备用于生长促进曲线测定的细胞》。

分析：以低密度接种细胞（2–50个细胞/cm2），接下来固定，染色，计数。

1、对每个细胞系和每个批次血清，标记10个直径60mm的平皿。标记在平皿的侧壁靠下部分，包括对照。

2、每个平皿加入5ml含10%待测FBS的培养基，加入400个细胞。

3、在细胞培养箱中37℃，5%CO2孵育10-14天。

4、弃掉上清，加入足量石炭酸复红-亚甲基蓝溶液，覆盖每个平皿，作用10分钟。

5、弃掉染液，用蒸馏水冲洗几遍。平皿倒置在吸水纸巾上，风干。

计数并记录阳性克隆数，以及阳性染色克隆的总表面积（mm2）。计算均值和标准差。

接受标准：接种效率%=克隆数÷接种细胞数×100，比较FBS批次之间的结果，选择一个好的批次用于某个特定细胞的培养。

综上所述，您是不是已经对美国药典关于胎牛血清细胞克隆率测定的描述，有所了解。如果还有其他疑问，请咨询威正翔禹/缔一生物资深专家免费热线：400-166-8600。