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只用一招,简单祛除细胞上的支原体!

点击次数:3503   发布时间:2019/9/2 16:43:38

 细胞培养*怕支原体污染,但有一些被污染的细胞不能被丢弃时该怎么办?今天小编把上惯用的一个小绝招教给你,简单有效!

 

如何祛除细胞上的支原体污染?

 

据研究表明,约98%的支原体存在于细胞表面和细胞间隙。支原体直径约180~350nm,比细胞小很多,经低速离心与细胞分离。通过反复悬浮冲洗、离心,加上使用我们的Zell Shield®,即可在细胞培养四代以内有效地祛除支原体。

 

什么是Zell Shield®?

Zell Shield®是一种链青霉素类复合抗生素,

对细胞影响很小,可以有效抑制细胞培养中的

支原体、细菌、霉菌、真菌等微生物增殖。

普通的链霉素、青霉素对支原体没有效果。

 

那为什么Zell Shield®有效呢?

因为Zell Shield®是由Minerva公司生产的专门针对支原体的抗生素。

德国Minerva公司是由全球著名的罗伯特·科赫研究所中分离出来的,专注于支原体、细菌的污染控制,尤其以支原体和军团菌的祛除、检测而闻名。Zell Shield®是Minerva公司的一项产品,不但对细胞培养中的细菌、真菌、霉菌有效,更是对支原体的祛除有确切效果。

 

具体是怎么操作呢?

1.首先把被支原体污染的细胞消化下来,

放入离心管离心,弃上清。

再加入干净的PBS悬浮冲洗细胞、

低速离心(300~500r/min)、弃上清,

反复三次。

这样可祛除细胞表面60%~70%的支原体,

支原体还剩约30%~40%.

2.细胞加入含1%Zell Shield®的新鲜培养基,

传代培养。

这时因培养基中Zell Shield®的抑制作用

细胞培养过程中,

虽然细胞增殖,但残留的支原体无法增殖。

细胞需再次传代时,把第二代细胞消化下来,

离心,弃上清。

加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清,

反复三次,

这时,细胞上残留的支原体大约已剩余为*初污染量的10%左右。

3.细胞加入含1%Zell Shield®的新鲜培养基,

传代培养。

需再次传代时把第三代细胞消化下来,

离心,弃上清。

加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清,

反复三次,

可再次祛除60%~70%的残余支原体,

通过冲洗、抑制、换液等操作,

细胞中支原体的残留污染量大约只剩3%左右。

4.细胞加入含1%Zell Shield®的新鲜培养基,

传代培养。

需再次传代时把第四代细胞消化下来,

离心,弃上清。

加入新鲜PBS悬浮冲洗、再离心、弃上清,

反复三次,

可再次祛除60%~70%的支原体,

此时,支原体残留量大约已低于1%.

 

支原体的增殖亦有密度要求,

用Zell Shield®处理过四代的细胞,

即便撤掉Zell Shield®,

只要保证没有新的支原体人为再次带入,

原有支原体也无法再增殖,

随着传代,换液,支原体的老化、死亡,

细胞中的支原体污染基本就彻底解决了。

 

敲黑板,划重点啦

 

1.每次传代时,重复三次对细胞悬浮冲洗步骤非常重要,操作要正确、规范,以达*佳效果!

 

2.在培养基中加入1%Zell Shield®抑制支原体增殖!

 

3.使用安全的血清、培养基等试剂,不再有新的支原体加入!

 

做到以上三点即可确保祛除支原体污染。

 

Zell Shield®工作原理是什么?

支原体祛除剂Zell Shield®(培养基用)

是一种即用型链青霉素类的复合抗生素,

在培养基中1%的浓度

通过阻止原核生物DNA及蛋白的合成

抑制细胞培养中遇到的

细菌、真菌、霉菌增殖,

更可以有效、精确地抑制支原体增殖,

且对细胞基本安全。

品名:支原体祛除剂Zell Shield®(培养基用)

生产商:Minerva Biolabs GmbH

生产地:德国

货号:13-0050

规格:50mL/瓶

储存温度:-18℃

使用注意事项:实验室初次使用,注意分装,分装后的小包装Zell Shield®仍-20℃避光冷冻保存,现配现用。

市场价格:2200元

货期:大多数时间国内有现货

原创作者:北京缔一生物科技有限公司

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