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如何评价和选择支原体检测试剂盒

点击次数：5134 发布时间：2019/11/11 16:54:38

要选一款合适的支原体检测试剂盒，有如下几个评价指标：

1. 灵敏度。

灵敏度常用支原体基因组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。

2. 特异性和广谱性。

质量好的试剂盒应检测的支原体物种越多越多，并且特异性强，即只针对支原体，不针对其他细菌等微生物，没有交叉反应。

3. 稳定性。

冻干粉比液体试剂的稳定性高。

4. 样本类型及样本处理。

一款好的试剂盒，会标出它适合的样本类型，也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有抑制PCR反应的物质，因此需要处理。

5. 对照品。

一个好的试剂盒，会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有抑制PCR的物质，则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性抑制，因此支原体条带越强，内控条带越弱（下图）。

图. 1. 100 bp DNA Ladder；2. 阴性对照，有内控条带；3. 阳性对照，有支原体阳性条带；4. 样本有PCR抑制剂；5.阴性样本；6.阳性样本，支原体污染较轻；7.阳性样本，支原体污染较重。图片来自Minerva Biolabs公司生产的Venor®GeM Advance支原体检测试剂盒说明书

但支原体核酸检测法（NAT）并没有载入我国药典。我们药典指定的是支原体培养法和DNA染色法。但2018年《中国药事》第8期上，中国食品药品检定研究院刊发了一篇文章——《支原体检查的核酸检测方法及方法学验证的思考》，提出提出要与接轨，逐渐推进NAT的开展，因其“具有快速、灵敏、便捷等特点”。

欧洲药典规定，核酸法如替代培养基，核酸法的灵敏度需达到10 CFU·mL-1；如替代DNA染色法，核酸法的灵敏度需达到100 CFU·mL-1。该文也提出，需对NAT进行特异性、检出限和耐用性的验证。

因此，对于需要NAT法检查支原体的生物制品和细胞治疗产品企业，可选择试剂盒已经验证并提供有参比物质的知名品牌厂家，尽管后续仍需按照待测样本类型进行方法的适用性验证，并同步开展药典方法的平行检测研究，但已为NAT法检查支原体带来极大的方便。

Minerva Biolabs公司是著名的微生物污染控制公司，创始人来自于德国的罗伯特·科赫微生物研究所。其支原体检测和祛除产品，在世界上居于位置。其中提供的用于药品或生物制品企业过程控制的试剂盒和标准品如下：

（qPCR法）支原体检测试剂盒

英文品名：Venor®GeM qEP

货号与规格：11-9025，25 tests/盒

11-9100，100 tests/盒

11-9250，250 tests/盒

（PCR法）支原体检测试剂盒

注：不含聚合酶

英文：Venor® GeM Classic

货号与规格： 11-1025，25 tests/盒

11-1050，50 tests/盒

11-1100，100 tests/盒

11-1250，250 tests/盒

10CFU支原体灵敏度标准品

品名：10CFU™ Sensitivity Standards

产品	货号	规格	NCTC	ATCC
精氨酸支原体	102-1003	3管10CFU支原体标准品+2管阴性对照/盒	10129	23838
口腔支原体	102-2003		10112	23714
鸡败血支原体	102-3003		10115	19610
肺炎支原体	102-4003		10119	15531
关节液支原体	102-5003		10124	25204
发酵支原体	102-6003		10117	19989
猪鼻支原体	102-7003		10130	17981
莱氏无胆甾原体	102-8003		10116	23206
螺原体	102-9003		10164	27556
支原体套装（包含EP 2.6.7/ JP17版G3章列举的所有支原体物种）	102-0002	2管10CFU支原体标准品+2管阴性对照/盒	－－	－－

100CFU支原体灵敏度标准品

品名：100CFU™ Sensitivity Standards

产品	货号	规格	NCTC	ATCC
精氨酸支原体	103-1003	3管10CFU支原体标准品+2管阴性对照/盒	10129	23838
口腔支原体	103-2003		10112	23714
鸡败血支原体	103-3003		10115	19610
肺炎支原体	103-4003		10119	15531
关节液支原体	103-5003		10124	25204
发酵支原体	103-6003		10117	19989
猪鼻支原体	103-7003		10130	17981
莱氏无胆甾原体	103-8003		10116	23206
唾液支原体	103-1103		10113	23064