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支原体PCR验证用标准品，认准MB产品

点击次数：4284 发布时间：2020/10/13 10:02:29

支原体PCR方法在上已得到欧洲、日本和美国药典的承认，它可以取代支原体经典药典方法（如培养法、DNA染色法），但前提是方法需要进行验证。在这方面，国内药典尚无明确说明，但相关权威机构在一些不同场合和法规指南中表示，将逐步与接轨，如果核酸法经过验证，保证其足够的灵敏度、特异性和耐用性，则也认可。

国内尚不能大规模推广核酸法主要有两个瓶颈：一是国内缺乏参比标准品。而且支原体是灭活的，级别至少有10CFU，如果再有100CFU则更好。二是企业仍需要用自己的样本基质进行PCR的方法学验证，这样增加了一定的难度。另外，支原体的DNA抽提也是一个必要的过程，难以统一化。

事实上，对支原体PCR或qPCR方法进行验证，除了可参考试剂盒生产厂家自身的验证外（尽管它不能完全替代用户自己的验证，但可提供特异性验证的一些信息，如使用哺乳动物细胞DNA、某些细菌菌属DNA等，而不必使用者自己再去尝试），用户自己主要是对方法的检测限和耐用性进行验证，这里*常用的就是10CFU支原体标准品。100CFU标准品可作为一个补充。

德国MB厂家集20多年支原体防控检测领域的经验，开发有一系列的相关产品，包括支原体核酸法验证用标准品。其10CFU标准品为灭活支原体冻干粉形式，经精确标定。所用支原体培养基符合欧洲医药管理局标准。支原体为灭活形式，不会带来污染，同时冻干粉又保证了产品的稳定性，不会受温度波动的影响。

每批支原体都会提供CFU与基因拷贝数的比值，以方便二者的换算。因为10CFU只能确定PCR能够达到的检测限在10CFU以下，但无法具体确定灵敏度的数值。带DNA拷贝数标定的基因组DNA标准品则可进一步确定检测限的数值。而且核酸法*终检测的对象是核酸，而产品的QC主要关注的是支原体，核酸的存在是侧面反映支原体存在的一个指标。CFU与基因拷贝数的比值很好地对二者进行了关联。

MB的支原体标准品批次均经厂家QC合格后方能出厂，包括其Ct值达到一定要求。另需注意的是，100CFU标准品不能按倍数稀释为10CFU标准品。因支原体在液相中不是均一分布，而大多呈集聚状态。因此按倍数稀释后，会造成支原体量上的偏差。

德国MB的支原体菌株来自英国菌种保藏中心（NCTC），均有ATCC编号。支原体传代次数少，发生突变几率低。而且经广泛引用和认可，部分如下：