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支原体检测qPCR技术在支原体检测指标有大作用
点击次数:7390 发布时间:2023/7/13 9:37:25
PART.01qPCR检测支原体的技术原理
通过扩增高度保守的rRNA操纵子,或者更准确地说,扩增支原体基因组中的16S rRNA编码区,可以特异性地检测支原体。在FAM通道检测支原体特异性扩增片段。在HEX通道检测内部扩增对照的扩增。它能特异性检测所有导致细胞污染的柔膜体物种。真核DNA不会被扩增。通过内部对照,可检测PCR抑制剂的存在或不正确的DNA提取引起的假阴性结果。
样本通常为细胞培养上清液,如检测其他组织或细胞样本,需要对样本进行额外的处理,例如蛋白酶消化等过程。检测程序通常可在3小时内完成。
PART.02 qPCR用于支原体检测的优势
快速简便
与动辄30天起步的传统培养法相比,qPCR技术的反应时间相对较短,通常在几小时内就可以完成,大大缩短了用于检测对的时间成本。
灵敏度高
qPCR技术可以在非常低的病原体浓度下进行检测,这种高灵敏度使得qPCR能够有效地检测细胞培养体系、实验或生产流程中,是否发生支原体污染,即使在污染的早期阶段,也能够得到准确的结果。
并且配合灵敏度标准品,进行灵敏度的验证,进一步完善方法学验证的流程。
以德国Minerva Biolabs公司的Venor Gem qEP为例,检测限可达到≤10CFU/ml。
特异性强
qPCR技术可以使用特异性引物和探针来选择性地扩增目标支原体的DNA序列。通过设计引物和探针与目标序列高度匹配,可以避免非特异性扩增产物的产生,从而提高检测的特异性。
以德国Minerva Biolabs公司的Venor Gem qEP为例,一次检测即可涵盖所有常见易感染细胞的支原体物种(包括欧洲药典规定的9种支原体)。与细菌和真核DNA无交叉反应。
定量能力
与传统的PCR技术相比,qPCR可以提供定量信息。通过利用荧光探针或DNA染料,可以实时监测PCR反应过程中的荧光信号强度,从而得到目标序列的定量结果。这种定量能力使得qPCR技术在支原体载量的测定和污染进程的监测中非常有用。
PART.03 支原体检测试剂盒
德国MB公司生产的支原体qPCR检测试剂盒(均为探针法检测):Venor Gem qEP,有以下优点:
①遵循欧洲药典流程要求
②高特异性。一次检测即可涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),根据序列一致性,至少可以检测到107种支原体物种。操作简单,易于观察(使用MB的试剂盒,多种支原体物种均为阳性,其他微生物或真核细胞均为阴性,无交叉反应)。
③高灵敏度。MB公司的支原体qPCR检测试剂盒经典法检测限可达到≤10CFU/ml。
④各类标准品配套齐全
10CFU/100CFU的敏感度测试的标准品,便于方法学验证。
支原体基因组DNA和细菌基因组DNA,便于特异性验证。
支原体绝对定量标准品,便于*后定量检测。
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